Pět sil:
● Přístroj konfigurovaný s krokem extrakce a purifikace nukleové kyseliny
● Přístroj konfigurovaný s ultrazvukovým extrakčním modulem
● Přístroj je konfigurován s plně automatickým režimem
● Přístroj konfigurovaný s proměnným zesílením teploty
● Přístroj je konfigurován s plně uzavřenou reagenční sadou
1. Musí být činidla pro detekci nukleových kyselin extrahována a purifikována?
Princip detekce nukleových kyselin je následující: za působení primeru se DNA polymeráza použije k provedení amplifikace řetězové reakce na templátové DNA/RNA (vyžadující reverzní transkripci NA) a poté se detekuje množství uvolněného fluorescenčního signálu pro stanovení zda vzorek obsahuje nukleovou kyselinu (DNA/RNA) patogenu, který má být detekován.
1) Vzorky, které nebyly extrahovány nebo purifikovány, mohou obsahovat mnoho složek, které ovlivňují konečný výsledek: nukleázu (která může rozpustit cílovou nukleovou kyselinu a způsobit falešnou negativitu), proteázu (která může redukovat DNA polymerázu a způsobit falešnou negativitu), těžký kov sůl (která vede k inaktivaci syntázy a způsobuje falešně pozitivní ), příliš kyselé nebo příliš zásadité PH (což může způsobit selhání reakce), neúplná RNA (vedoucí k falešně negativnímu selhání reverzní transkripce).
2) Některé vzorky je obtížné přímo amplifikovat: Gram-pozitivní a někteří parazité, kvůli jejich tlustým buněčným stěnám a jiným strukturám, pokud neprojdou extrakčním a purifikačním procesem nukleové kyseliny, sada bez extrakce může selhat. Vzorky.
Proto se doporučuje vybrat testovací soupravu nebo přístroj nakonfigurovaný pro krok extrakce nukleové kyseliny.
2. Chemická extrakce nebo fyzikální ultrazvuková fragmentační extrakce?
Obecně řečeno, chemickou extrakci lze použít na většinu předúpravy a čištění.U tlustostěnných grampozitivních bakterií a některých parazitů se však také stává, že chemickou extrakcí nelze získat účinné templáty nukleové kyseliny, což má za následek falešně negativní detekci.Navíc chemická extrakce často používá silná činidla, pokud není eluce důkladná, je snadné zavést do reakčního systému silnou alkálii, což vede k nepřesným výsledkům.
Ultrazvuková fragmentace využívá fyzikálního drcení, které úspěšně využívá GeneXpert, přední společnost v oblasti POCT pro humánní použití, a má absolutní výhodu při extrakci nukleových kyselin některých komplexních vzorků (jako je Mycobacterium tuberculosis).
Proto se doporučuje vybrat testovací soupravu nebo přístroj konfigurovaný s krokem extrakce nukleové kyseliny.a optimální je, pokud je k dispozici ultrazvukový extrakční modul.
3. Ruční, poloautomatické a plně automatické?
To je problém ceny práce a efektivity práce.V současnosti jsou nemocnice pro domácí mazlíčky bez dostatečného personálu a extrakce a detekce nukleových kyselin je práce, která vyžaduje určité dovednosti a zkušenosti.Není pochyb o tom, že plně automatický stroj na extrakci a detekci nukleových kyselin je perfektní volbou.
4. Zesílení konstantní teploty nebo zesílení proměnné teploty?
Amplifikační reakce je spojením detekce nukleové kyseliny a profesionální technologie, která se tohoto spojení účastní, je složitá.Zhruba řečeno, enzymy se používají k amplifikaci nukleové kyseliny.V procesu amplifikace je detekován zesílený fluorescenční signál nebo vložený fluorescenční signál.Obecně řečeno, čím dříve se objeví fluorescenční signál, tím větší je obsah cílového genu ve vzorku.
Amplifikace při konstantní teplotě je amplifikace nukleové kyseliny při fixní teplotě, zatímco amplifikace s proměnnou teplotou je cyklická amplifikace přesně podle denaturace-žíhání-prodlužování.Byla provedena doba zesílení konstantní teploty, zatímco doba zesílení proměnné teploty je značně ovlivněna rychlostí nárůstu a poklesu teploty přístroje (v současnosti je mnoho výrobců schopno provést 40 cyklů zesílení za přibližně 30 minut).
Pokud jsou laboratorní podmínky dobré a zónování je přísné, je rozumné říci, že rozdíl v přesnosti mezi nimi nebude velký.Amplifikace s proměnlivou teplotou však syntetizuje více produktů nukleových kyselin za relativně kratší dobu.U laboratoří bez přísného zónování a odborného výcvikového personálu bude riziko úniku aerosolu nukleové kyseliny větší, falešně pozitivní nastane, jakmile dojde k úniku, což je extrémně obtížné odstranit.
Kromě toho je amplifikace při konstantní teplotě také náchylnější k nespecifické amplifikaci, když je vzorek komplexní (relativní reakční teplota je nižší a čím vyšší je teplota extenze, tím lepší je specifičnost vazby primeru).
Pokud jde o současnou technologii, spolehlivější je variabilní zesílení teploty.
5. Jak se vyhnout riziku úniku produktů amplifikace nukleových kyselin?
V současné době mnoho výrobců volí jako zkumavku pro reakci nukleových kyselin zkumavku pro PCR typu žlázy, která je utěsněna třením a teplotní denaturace při variabilní teplotní denaturaci v PCR amplifikaci s proměnlivou teplotou dosahuje 90 stupňů.
Celsia .Opakovaný proces expanze teplem a kontrakce chladem je velkou výzvou pro utěsnění PCR zkumavky a zkumavka pro PCR typu žlázy je relativně snadné způsobit únik.
Je vhodnější provést reakci se zcela utěsněnou soupravou/zkumavkou, aby se zabránilo úniku reakčního produktu.Bylo by perfektní, kdyby se podařilo vypracovat plně uzavřenou soupravu pro extrakci a detekci nukleových kyselin.
Takže nový plně automatický stroj na extrakci a detekci nukleových kyselin od New Tech má výše uvedených pět optimálních možností.
Čas odeslání: srpen-09-2023
